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免疫酶技術中濃度如何選擇
瀏覽次數:331發布日期:2021-12-09

免疫酶技術中,我們首先要確定的變異因素就是酶標記物的工作濃度。因為酶標記物濃度的很小變化,便可導致試驗結果產生很大的波動。另外,由于濃度過高,可使非特異性反應增加,而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此,正式試驗前必須準確滴定其工作濃度。


1. 酶標記抗體的滴定方法是:將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上,然后將經過一系列稀釋的酶標抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反應,以酶與底物的顯色反應程度來確定酶標記抗體的效價,或稱工作濃度。


ELISA實驗


2. 其步驟為:先將抗原(或抗體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右,于聚苯乙烯板孔內加0.1ml,4℃一夜,次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標記抗體用1%BSA-PBS液依次稀釋成1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600(根據據抗體的滴度而定),分別加入反應孔中,每個稀釋度二孔,每孔0.1ml,37℃孵育1小時后洗滌。然后加底物液,每孔0.1ml,37℃10~30分鐘。以2M H2SO4 0.05ml終止反應。


3. 結果判定主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值,并以OD為縱座標,結合物濃度為橫座標,繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右,且曲線斜率zui大時的酶標抗體稀釋度,即為該標記物的工作濃度。


上海紀寧生物科技有限公司主要經營進口、國產ELISA試劑盒、細胞、血清、抗體、金標試劑盒、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、免疫酶等產品,是一家專門從事生物技術相關產品研發和銷售的綜合性生物科學公司,產品國內大部分地區。公司專注于高品質ELISA試劑盒的整合和研發,打造國內優質的ELISA試劑盒。

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